常見(jiàn)問(wèn)題
1)為了保證檢測質(zhì)量,臨床PCR實(shí)驗室應有充分合理的空間,良好的照明和空調設備。工作環(huán)境雖不是檢測質(zhì)量的直接原因,但寬敞舒適的實(shí)驗室環(huán)境將肯定有利于檢驗質(zhì)量的保證。
2)合理有效地對儀器設備進(jìn)行管理,定期做維護和校準,使其處于一個(gè)良好的狀態(tài)。例如,定期校準移液器,使其保持足夠的準確度和精密度。定期維護熒光定量PCR儀的光學(xué)系統和反應孔間溫度差異,使其保持在良好狀態(tài)和允許的范圍內。此外,還包括天平,離心機,冰箱等設備的管理。
3)理想的試劑:主要有內外兩個(gè)因素,內在因素包括標本處理方法,用于核酸擴增的原材料及方法學(xué)設計等。外出因素包括試劑盒的運輸和保存中的問(wèn)題。
4)標準化操作流程:完整的臨床PCR程序由標本采集,運送,保存,編號,試劑準備,核酸提取,擴增和產(chǎn)物檢測,結果分析和報告等諸多環(huán)節,建立科學(xué)和與本實(shí)驗室配套的SOP文件,嚴格按SOP進(jìn)行操作。
5)主要污染源和防污染措施:PCR的主要污染源有標本中的大量待測微生物,克隆質(zhì)粒,大量存在實(shí)驗室中的特定微生物以及以前擴增產(chǎn)物的殘留污染等。這些都是實(shí)驗室最容易造成假陽(yáng)性的污染。因此,必須嚴格分區實(shí)驗室及遵守工作流程,使用化學(xué)清潔實(shí)驗臺面,使用紫外線(xiàn)照射和UNG方法消除擴增產(chǎn)物污染等等。
6)進(jìn)行室內和室間質(zhì)量控制,室內質(zhì)量控制可以確保實(shí)驗室室內測定質(zhì)量的一致性,室間質(zhì)量控制可以提供將實(shí)驗室測定情況與一室間和客觀(guān)標準進(jìn)行回顧性比較的數據。