技術(shù)專(zhuān)欄
利用抗原抗體特異性結合反應檢測各種物質(zhì)(藥物、激素、蛋白質(zhì)、微生物等)的分析.主要集中在以下幾方面:(1)實(shí)驗藥物動(dòng)力學(xué)和臨床藥物學(xué)中測定生物利用度和藥物代謝動(dòng)力學(xué)數等;(2)在藥物的臨床檢測中,監測藥物血液濃度;(3)在線(xiàn)監測藥物生產(chǎn)中有效組分的含量;(4)對藥品中特定的微量有害雜質(zhì)進(jìn)行評價(jià)。
免疫分析分類(lèi)
非標記免疫分析技術(shù):免疫擴散、免疫電泳
標記的免疫分析技術(shù):酶免疫分析、放射免疫分析、其它免疫分析法(熒光免疫技術(shù)、膠體金免疫技術(shù)、發(fā)光免疫技術(shù)和鐵蛋白免疫技術(shù)等)
免疫擴散
基本原理:可溶性的抗原和相應的抗體在溶液或凝膠中彼此接觸,形成不溶性抗原-抗體復合物沉淀。
單向免疫擴散(Single immunodiffusion)
基本原理:指抗原和抗體兩 種成分中只有一種擴散,另 一種被固定在凝膠中。
雙向免疫擴散(Double immunodiffusion)
基本原理:指可溶性抗原與相應抗體在瓊脂介質(zhì)中相互擴散,彼此相遇后形成一定類(lèi)型的特異性沉淀線(xiàn)。
電泳技術(shù)分類(lèi)
基本原理:免疫擴散與電泳技術(shù)相結合。
類(lèi)型:對流免疫電泳、火箭免疫電離、免疫電泳、雙向免疫電泳(交叉免疫電泳)
對流免疫電泳
基本原理:多數蛋白質(zhì)抗原在堿性緩沖液中帶負電荷,在電泳時(shí)從負極向正極移動(dòng)?贵w在堿性緩沖液只帶微弱的負電 荷,且相對分子質(zhì)量較大,電泳力較小,在瓊脂電滲力作用 下由正極向負極移動(dòng)。結果抗原和抗體定向對流,在兩孔間 相遇時(shí)發(fā)生反應,并在比例合適處形成肉眼可見(jiàn)白色沉淀線(xiàn)。
火箭免疫電泳(Rocket immunoelectrophoresis)
基本原理:也稱(chēng)免疫擴散,抗原在含有定量抗體的瓊脂糖中泳動(dòng),兩者比例適宜時(shí),在較短時(shí)間內生成錐形的沉淀峰。在一定濃度范圍內,沉淀峰的高度與抗原含量成正比。
免疫電泳
基本原理:先將待側樣本作瓊脂凝膠電泳,各蛋白抗原組分被分成不同的區帶,然后與電泳方向平行挖一小槽,加入相應的抗血清,把分成區帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴散,在各區帶相應的位置形成沉淀弧。
標記技術(shù)分類(lèi)
基本原理:采用熒光素、同位素或酶等示蹤物質(zhì) 標記抗體(或抗原)進(jìn)行抗原 -抗體反應,通過(guò)對免疫復合物中的標記物的測定,達到對免疫反應進(jìn)行監測的目的。
標記免疫技術(shù)主要類(lèi)型:放射免疫技術(shù)、酶免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)
放射免疫標記技術(shù)(RIA)
基本原理:根據抗原抗體特異性結合的原理,以放射性同位素標記抗原或抗體,根據射線(xiàn)的多少定性或定量測定待檢標本中抗體或抗原的量。
酶免疫標記技術(shù)(ELISA)
基本原理:指酶標記抗體或酶標記抗體進(jìn)行的抗原抗體反應,然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應,用于定量測定。
熒光免疫分析(FIA)
基本原理:以熒光素標記抗體或抗原作為示蹤劑的一種新的免疫分析技術(shù),其原理與ELISA相似。該法既可對液體中的抗原和抗體定量,也可對組織切片中的抗原、抗體進(jìn)行定性和定量。一般由于樣品、試劑的自身熒光和激發(fā)光的散射,本底熒光高,影響了測定的靈敏度。一般以鑭系元素作為熒光標記(示蹤劑)。示蹤劑與相應抗原或抗體結合后,借助熒光檢測儀察看熒光現象或測量熒光強度,從而判斷抗原或抗體的存在、定位和分布情況或檢測受檢標本中抗原或抗體的含量。
膠體金免疫技術(shù)(CGIA )
基本原理:以膠體金作為示蹤標記物,主要利用了金 顆粒具有高電子密度的特性 ,在金標蛋白結合處,在顯 微鏡下可見(jiàn)黑褐色顆粒,當 這些標記物在相應的配體處 大量聚集時(shí),肉眼可見(jiàn)紅色 或粉紅色斑點(diǎn)。
化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)(CLIA )
基本原理:利用化學(xué)或生物發(fā)光系統作為抗原抗體反應的指示系統,借以定量檢測抗原或抗體的方法,發(fā)光物質(zhì)可直接作為